綜觀國內(nèi)外微體繁殖的發(fā)展，植物組織培養(yǎng)技術(shù)作為工廠化育苗的重要手段已經(jīng)得到了廣泛應(yīng)用。

1、常規(guī)組培的三個(gè)過程：無菌培養(yǎng)體系的建立；增殖擴(kuò)繁；生根和移栽。

1.1 如何產(chǎn)生試管苗瓶外生根技術(shù)

生根和移栽是決定能否進(jìn)行大量生產(chǎn)和應(yīng)用實(shí)際的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。而如何提高試管苗的生根和移栽成活率就成為了工廠化育苗主要研究的任務(wù)之一。針對有些植物種類在試管中難以生根或根系發(fā)育不良，吸收功能極弱，移栽后不易成活的特點(diǎn)，同時(shí)為了縮短育苗周期，降低生產(chǎn)成本，國內(nèi)外許多學(xué)者，就現(xiàn)有生根和馴化程序進(jìn)行了改進(jìn)，從而產(chǎn)生了試管苗瓶外生根技術(shù)。試管苗瓶外生根技術(shù)是近幾年研究成功的一項(xiàng)組培生根的先進(jìn)技術(shù)。該技術(shù)的關(guān)鍵是將試管苗的生根階段中的生根和馴化結(jié)合起來，省去了用來提供營養(yǎng)物質(zhì)并起支持作用的培養(yǎng)基，芽苗試管內(nèi)生根的傳統(tǒng)程序。該技術(shù)的應(yīng)用不僅減少了一次無菌操作的步驟，提高了培養(yǎng)空間，又簡化了組培程序，降低了生產(chǎn)成本，提高了繁殖系數(shù)，解決了組培工廠化育苗生根的難題。在這方面，debergh等認(rèn)為誘導(dǎo)試管苗生根過程的費(fèi)用占總費(fèi)用的35%-75%。有研究證實(shí)，采取瓶外生根技術(shù)，則可以減少總費(fèi)用的70%左右。近年來，隨著組培工廠化育苗的發(fā)展，國內(nèi)外開展了試管苗瓶外生根的解剖學(xué)研究、影響瓶外生根生理原因的基礎(chǔ)研究、技術(shù)方法研究，并且開始應(yīng)用于生產(chǎn)，取得了很大成功。筆者針對近年來試管苗瓶外生根的研究進(jìn)展作一簡述，旨在為試管苗瓶外生根提供科學(xué)的理論、技術(shù)借鑒。

2、試管苗瓶外生根發(fā)生、發(fā)育的形態(tài)解剖構(gòu)造

大量的研究表明，植物的組織培養(yǎng)根的發(fā)生都來自不定根。試管苗瓶外生根與試管內(nèi)生根的形態(tài)解剖構(gòu)造大體相似。不定根的形成從形態(tài)上可分為兩個(gè)階段，即根原基的形成和根原基的伸長及生長。據(jù)測定，根原基的形成約經(jīng)歷48h。根原基的伸長和生長階段快的需要3-4d，慢的則要20-30d,zhoujy等在研究蘋果試管小苗生根時(shí)對不定根的形成進(jìn)行了組織學(xué)觀察，認(rèn)為不定根的發(fā)端是在苗基部上方約0.1-0.5mm的狹長區(qū)帶。蘋果的無根試管苗剛切下時(shí)，其基部含有典型的外韌維管束，在木質(zhì)部和韌皮部之間有2-3層扁平細(xì)胞構(gòu)成的形成層帶，此時(shí)細(xì)胞處于靜止?fàn)顟B(tài)，次生組織不發(fā)達(dá)。之后在緊接形成層處出現(xiàn)分生組織，隨后開始細(xì)胞分裂，經(jīng)過脫分化，逐漸分化形成根原基。試管苗瓶外根原基產(chǎn)生的部位一般在愈傷組織、皮層、髓射線、維管射線和形成層等。不定根的發(fā)端因植物的不同而異，這里不再贅述。筆者在研究月季試管苗瓶外生根時(shí)指出，瓶外生根苗根表皮細(xì)胞與皮層細(xì)胞差異較小，其根比較年幼，分生能力旺盛。瓶外生根苗根系生長速度快，中柱發(fā)育早，有利于根系的建成。另外，瓶外生根苗莖干皮層細(xì)胞個(gè)體較小，液泡些　葉片表皮角質(zhì)層發(fā)達(dá)，葉片皮孔開張角度小，抗蒸騰作用和適應(yīng)能力增強(qiáng)，海綿組織和柵欄組織分化程度高，葉肉細(xì)胞中葉綠素含量高，光合性能優(yōu)于試管生根苗。

3、瓶外生根的影響因素

3.1 生長素對生根的影響

在植物的組織培養(yǎng)中，植物激素起著決定性的作用，而生長素都能促進(jìn)生根。不定根的發(fā)生和發(fā)育的整個(gè)階段都需要連續(xù)補(bǔ)充生長素，生長素的存在不僅有利于根原基的誘導(dǎo)，還有利于不定根的生長。但過高的生長素也會抑制根原基的生長，進(jìn)而影響根的伸長。大量的研究表明，根原基的啟動和形成階段生長素起著關(guān)鍵作用，而根原基的伸長和生長則可以在沒有外源生長素的條件下實(shí)現(xiàn)。生長素可能主要在根的誘導(dǎo)和發(fā)端起作用，但根原基形成后，較高濃度的生長素的繼續(xù)存在則不利于幼根的生長發(fā)育。瓶外生根正是基于上述原理，生根起始階段采用高濃度的生長素刺激根原基的形成，根原基伸長階段撤掉生長素，解除其抑制作用。曾端香等在研究牡丹繁殖技術(shù)時(shí)指出，叢生芽在試管外生根，只有體內(nèi)45水平下降，iaa水平升高后才有利于不定根的形成。因此生長激素的存在對試管苗瓶外生根是必需和必要的。

3.2試管苗的質(zhì)量對瓶外生根的影響

不同的植物、不同基因型、不同的幼化程度對分化不定根有決定性的影響。一般木本植物比草本植物難，只有多繼代后，年齡越幼化生根才容易。無根試管苗進(jìn)行瓶外生根前，必須進(jìn)行練苗過程。何云芳等在進(jìn)行金線蓮組培苗的試管外生根時(shí)采用松口練苗的成活率比封口練苗的提高5.3%。李紅旭在研究一品紅試管苗試管外生根時(shí)指出，通過強(qiáng)光充足練苗，使試管苗莖干及葉柄發(fā)紅，幼莖組織充實(shí)，達(dá)到較高木質(zhì)化程度，可提高抗性，促進(jìn)了生根。經(jīng)過鍛煉的試管苗，葉片抗蒸騰作用和適應(yīng)能力增強(qiáng)，光合性能顯著提高，適應(yīng)外界環(huán)境的能力增強(qiáng)。進(jìn)一步說明，生長旺盛的苗比生長細(xì)弱的苗生根力強(qiáng)。因此，多繼代，半木質(zhì)化，葉片肥厚，莖稈粗壯的無根苗是獲得較高生根率的保證。

3.3 不同生根方式對瓶外生根的影響

國內(nèi)外瓶外生根大多采用微體扦插法進(jìn)行，即將無根苗切下，經(jīng)過生長素處理后，扦插到基質(zhì)中，進(jìn)行保濕管理，來完成生根的方法。微體扦插基質(zhì)一般采用既透氣又保濕的基質(zhì)如苔蘚、蛭石、珍珠巖、泥炭等。何云芳等在進(jìn)行金線蓮組培苗試管外生根時(shí)指出，以苔蘚作基質(zhì)最為理想，地下和地上部分的生長都最為旺盛，成活率最高。陳宗禮等在研究狗頭棗組培苗試管外生根時(shí)認(rèn)為，蛭石具有透氣性、保水性都較好，即可滿足基部的吸水要求，又不會因濕度過大導(dǎo)致腐爛而死苗，生根率達(dá)到70.5%，生根數(shù)多而長，根系發(fā)育完整而健壯。在進(jìn)行一品紅試管苗試管外生根時(shí)認(rèn)為：珍珠巖空隙大，質(zhì)輕，透氣性好，且有一定的保水能力，扦插成活率最高，達(dá)到83.8%。

試管苗氣培生根作為瓶外生根的一種方法，在國內(nèi)也有了一定的研究。馮學(xué)贊等分別對木本植物和草本植物的氣培生根進(jìn)行了較為詳細(xì)的研究。將試管苗的莖段進(jìn)行激素處理后，放到無任何基質(zhì)的氣培容器中進(jìn)行生根，人為調(diào)節(jié)環(huán)境條件。其生根率與常規(guī)生根培養(yǎng)不相上下。

董玲等在進(jìn)行組培滿天星時(shí)，采用瓶外水培生根，將健壯試管苗的莖段用#$%生根粉處理后，然后扦插進(jìn)行水培，覆膜保濕管理。其生根率在90%以上，且根系發(fā)達(dá)，生長勢強(qiáng)。

3.4 環(huán)境條件對瓶外生根的影響

瓶外生根過程中的濕度、溫度和光照條件是獲得成功的關(guān)鍵因素。試管苗一般生長在高濕、弱光、恒溫條件進(jìn)行異養(yǎng)培養(yǎng)，出瓶后若不保濕，極易失水萎蔫死亡。因此，試管苗進(jìn)行瓶外生根時(shí)，必須經(jīng)過高濕到低濕，恒溫到自然變溫，弱光到強(qiáng)光的分步練苗過程。瓶外生根前期采取覆膜或噴霧等方法進(jìn)行，保證空氣相對濕度在85%以上，溫度起始階段控制在20°左右較為適宜，并及時(shí)增加光照，以保證苗基部的正常呼吸，并防止葉片失水萎蔫。瓶外生根后期采取加強(qiáng)通風(fēng)逐漸降低濕度和溫度，以增強(qiáng)幼苗的自養(yǎng)能力，促進(jìn)葉片保護(hù)功能快速完善，氣孔變小，增強(qiáng)抗性和適應(yīng)外界環(huán)境條件的能力，生根率提高。溫度、光照、基質(zhì)水分和空氣濕度的平衡是獲得較高生根率的保證。在影響瓶外生根的環(huán)境因子中，最重要的是溫度，其次是基質(zhì)水分和濕度，最后是光照。

4、試管苗瓶內(nèi)與瓶外生根的比較

4.1 生根率的比較

大量試驗(yàn)證明，瓶外生根的生根率比瓶內(nèi)生根率略低。其主要原因是試管苗從無菌狀態(tài)的高溫、高濕、弱光的環(huán)境過渡到有菌狀態(tài)的自然條件，一些弱苗、小苗因不適應(yīng)環(huán)境條件的變化導(dǎo)致死亡。陳宗禮等分析，認(rèn)為未生根前有死苗的現(xiàn)象，一種為基部腐爛而死，另一種為葉片失水萎蔫而死，前者是由于基部濕度過大所致，后者由于無根苗在扦插后的新環(huán)境下失去了水等物質(zhì)而破壞了它們間的動態(tài)平衡所致。還有研究認(rèn)為，瓶外生根的生根率與瓶內(nèi)生根率不相上下，或高于瓶內(nèi)生根率。

4.2 成活率的比較

移栽成活率是檢驗(yàn)組培是否成功的關(guān)鍵，也是檢驗(yàn)組培能否進(jìn)行工廠化的關(guān)鍵。試管無根苗瓶內(nèi)生根和瓶外移栽是兩個(gè)單獨(dú)過程，其生根率和移栽成活率是需要累計(jì)連續(xù)計(jì)算的，而瓶外生根率是將生根和移栽合二為一。綜合國內(nèi)外研究認(rèn)為，試管苗瓶外生根的生根率比瓶內(nèi)生根后移栽成活率顯著提高。究其主要原因，形態(tài)解剖方面，因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基上誘導(dǎo)形成的根與芽莖的輸導(dǎo)系統(tǒng)不同，或者根細(xì)小，無根毛，發(fā)育不良造成死亡。生理功能方面，生根試管苗的根系無吸收功能或極低，氣孔不能關(guān)閉，開口過大，葉片光合能力低等原因造成。瓶外生根苗避免了根系附著的瓊脂造成的污染腐爛，并且發(fā)育正常健壯，而瓶內(nèi)生根根系往往是肉質(zhì)根，吸收功能很差。瓶外生根在生根過程中已經(jīng)逐步適應(yīng)了環(huán)境，經(jīng)受了自然環(huán)境的鍛煉，不適應(yīng)環(huán)境的弱苗在生根過程中已經(jīng)被淘汰，移栽苗都是抗逆性強(qiáng)的壯苗，容易成活。

5、討論

國內(nèi)外在組培工廠化育苗中開展了瓶外生根的大量研究，基本明確了試管苗瓶外不定根的發(fā)生、發(fā)育的形態(tài)解剖構(gòu)造，定性地闡明了生根過程中植物激素的作用，同時(shí)指明了影響瓶外生根的相關(guān)因子。

瓶外生根的介質(zhì)，即可以將組培無根苗置于氣培容器中進(jìn)行氣培生根，也可以進(jìn)行水培生根。目前應(yīng)用最多的是將組培無根苗扦插于蛭石、珍珠巖、泥炭、苔蘚等基質(zhì)中來完成瓶外生根過程。但應(yīng)根據(jù)不同植物的種類、生根的難易、繼代的次數(shù)決定采取何種方式。

瓶外生根作為一種先進(jìn)的組培生根技術(shù)，是把生根與馴化相結(jié)合，有效縮短了育苗周期，節(jié)約成本，節(jié)約空間，提高了移栽成活率，加速了種苗繁殖的進(jìn)程，因此是一項(xiàng)值得應(yīng)用和推廣的技術(shù)。

采用植物非試管快繁的計(jì)算機(jī)智能控制系統(tǒng)能解決瓶外生根對于環(huán)境溫光氣熱營養(yǎng)的精確化控制，使基質(zhì)濕度，葉片的水平衡，光照，礦質(zhì)營養(yǎng)分得到最適控制，無機(jī)的苗床環(huán)境加上定期的殺菌可大大降低瓶外生根的真菌感染率，運(yùn)用該系統(tǒng)進(jìn)行試管苗的瓶外生根，可大大降低組培苗成本，比傳統(tǒng)的瓶外生根技術(shù)成活率大幅度提高，這將是未來組培上運(yùn)用最為重要的技術(shù)。

瓶外生根初期，試管苗內(nèi)源激素含量和激素處理濃度、時(shí)間的關(guān)系，是瓶外生根研究的主要方向。只有明確不同植物試管苗瓶外生根率達(dá)到最高時(shí)的內(nèi)源激素的水平，才能有針對性采取有效措施使試管苗有利于生根的方向生長發(fā)育，從而提高繁殖數(shù)量和質(zhì)量，瓶外生根的標(biāo)準(zhǔn)化將是今后的發(fā)展趨勢。

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