污染是指在培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)基或培養(yǎng)材料上滋生細(xì)菌、真菌等微生物，使培養(yǎng)材料不能正常生長(zhǎng)導(dǎo)致培養(yǎng)失敗的現(xiàn)象。

1.1 造成污染的因素

（1）培養(yǎng)基及各種使用器具消毒不徹底

（2）外植體滅菌不徹底，有菌殘存在細(xì)胞組織中

（3）操作時(shí)人為因素帶入

（4）環(huán)境不清潔

（5）超凈工作區(qū)域污染

1.2污染來(lái)源

（1）真菌：

室內(nèi)真菌種類(lèi)主要有芽枝孢霉屬、曲霉屬、鉸鏈孢霉屬、鐮刀霉屬、青霉屬等。春、夏季，尤其是南方的梅雨時(shí)節(jié)，溫暖潮濕，非常適合真菌生長(zhǎng)。如果長(zhǎng)期使用空調(diào)而不注意通風(fēng)，可引起室內(nèi)真菌污染。室內(nèi)有空調(diào)比沒(méi)有空調(diào)情況下曲霉菌落數(shù)多4倍。

（2）細(xì)菌

細(xì)菌是無(wú)孔不入的微生物，為避免細(xì)菌的侵襲，科學(xué)家曾嘗試用抗微生物材料生產(chǎn)各種用品，但效果不十分理想，因?yàn)檫@些材料雖然能殺死細(xì)菌，卻充滿(mǎn)了化學(xué)物質(zhì)。

（3）組織培養(yǎng)過(guò)程中的污染源

屋內(nèi)潮濕，菌類(lèi)繁衍較多、物品帶菌多、屋內(nèi)不干凈、屋內(nèi)有帶菌組培苗、接種方法不正確。

1.3 污染傳播途徑

（1）戶(hù)外風(fēng)傳播

菌類(lèi)細(xì)小如塵，隨風(fēng)飄散，由上下落，見(jiàn)濕就長(zhǎng)。

（2）渦流傳播

超凈工作臺(tái)上，擺放物品太多，當(dāng)無(wú)菌風(fēng)吹過(guò)時(shí)，就會(huì)在物品周?chē)�形成渦

流群，菌類(lèi)就會(huì)在渦流群中停留，從而降低凈化效果，增加污染機(jī)會(huì)。

（3）接種傳播

臟手每只帶有細(xì)菌4萬(wàn)-40萬(wàn)，干凈的手，指甲蓋大小也有3200多個(gè)細(xì)菌。指甲縫可以窩藏30多種細(xì)菌。如果手上帶菌較多，在操作過(guò)程中，就難免有菌落入培養(yǎng)基或植物材料上，而導(dǎo)致污染。另外，不正確操作也會(huì)增加污染機(jī)率，掀蓋生硬，滅菌不夠，操作過(guò)慢等。接種過(guò)程應(yīng)該輕開(kāi)蓋，火滅慢，操作快。

1.4 預(yù)防污染的措施

（1）組培過(guò)程中使用的培養(yǎng)基以及接種過(guò)程中使用所有器具必須采用適當(dāng)方法嚴(yán)格滅菌。

（2）按照要求選擇外植體，采取措施盡量減少外植體上的帶菌量，以利于材料滅菌。如對(duì)枝條進(jìn)行預(yù)培養(yǎng)，以其新抽枝作為外植體可大大降低污染。

（3）要注意保持接種和培養(yǎng)環(huán)境的清潔，定期進(jìn)行熏蒸或噴霧消毒。保持

室內(nèi)空氣流通可以減少室內(nèi)真菌數(shù)量；保持室內(nèi)空氣干燥，如使用空調(diào)“除濕”

功能，也可減少真菌生長(zhǎng)繁殖。

（4）進(jìn)行無(wú)菌操作時(shí)要嚴(yán)格按照無(wú)菌操作規(guī)程進(jìn)行，避免人為因素造成污染。

（5）污染物品和污染培養(yǎng)基必須經(jīng)高壓滅菌，徹底殺死各種微生物后再進(jìn)行清洗。

1.5 污染原因判斷及污染苗搶救

（1）若污染菌類(lèi)是零星分散在培養(yǎng)基中，則可確定是人為引起的污染，比如培養(yǎng)基滅菌不徹底；超凈工作臺(tái)長(zhǎng)時(shí)間不換濾網(wǎng)，致使凈化能力降低；接種用具滅菌不徹底；操作不正確，動(dòng)作生硬緩慢，開(kāi)瓶時(shí)間太久，接種臺(tái)擺放物品雜亂，操作中心在人體范圍之內(nèi)；接種室長(zhǎng)期不滅菌，菌類(lèi)太多。

（2）若污染菌類(lèi)是從材料周?chē)�長(zhǎng)起，則可證明是植物材料帶菌引起。可能是接種用具滅菌不徹底，接種時(shí)材料被污染；或者是未及時(shí)發(fā)現(xiàn)污染苗，接種過(guò)程交叉感染；

（3）若是外植體，菌類(lèi)從材料培養(yǎng)基以上部分長(zhǎng)起，而不是從培養(yǎng)基先長(zhǎng)

起，且發(fā)生在5天以后，則說(shuō)明是材料帶的內(nèi)生菌。若從培養(yǎng)基以下開(kāi)始長(zhǎng)菌，發(fā)生時(shí)間較早，且有從里向外的趨勢(shì)，則說(shuō)明是切口引起的污染；

搶救措施：

（1）真菌污染后，如果已形成孢子，則必須經(jīng)高壓滅菌后扔掉，即使僅形成菌絲，菌絲能夠達(dá)到材料內(nèi)部，因此，真菌污染是滅絕性的。但若是細(xì)菌污染，由于細(xì)菌繁殖是靠芽孢，細(xì)菌不會(huì)彌散整個(gè)空間，因此只要及時(shí)發(fā)現(xiàn)，將材料上部未感菌的部分剪下轉(zhuǎn)接，材料仍可以用。

（2）用抗生素等殺菌藥劑的處理，雖有不少報(bào)道，但至今還未發(fā)現(xiàn)那種抗生素能夠?qū)Ω鞣N菌都有效，并且常常也會(huì)影響植物材料的正常生長(zhǎng)分化。另一些藥劑，雖殺菌效果好，但往往容易引起鹽害，也無(wú)法利用。

組培常見(jiàn)問(wèn)題之污染及其預(yù)防措施，謝謝閱讀。